PLAYLYST
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Propriétés et affinité de ligands de récepteurs aux perturbateurs endocriniens chez <i>Lymnaea stagnalis</i> (Mollusques, Gastéropodes) |
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Recherche
Contexte et problématique
Le gastéropode aquatique Lymnaea stagnalis a été retenu pour le développement de Lignes Directrices de l’OCDE pour des tests de reprotoxicité sur mollusque aquatique. Il s’agit de tests in vivo sur cycle de vie partiel ou complet qui se positionnent respectivement aux niveaux 4 et 5 du Cadre Conceptuel de l’OCDE pour les tests et l’évaluation des perturbateurs endocriniens. Dans un premier temps, le projet de Ligne Directrice sur cycle de vie partiel devrait pouvoir être soumis à l’OCDE à la fin de l’année 2014. Ce test in vivo repose essentiellement sur des mesures de traits de vie caractérisant la reproduction, notamment fécondité et fertilité. Ces critères peuvent varier sous l’effet de perturbateurs endocriniens mais ils peuvent aussi réagir à des composés agissant sur la reproduction par d’autres modes d’action. Il est donc indispensable d’associer ce test de niveau 4 à des tests permettant d’identifier le(s) mécanisme(s) qui sous-tende(nt) les effets in vivo.
Objectif
L’objectif du projet PLAYLYST est de développer des méthodes in silico (niveau 1) et in vitro (niveau 2) permettant d’identifier sans équivoque le caractère perturbateur endocrinien de composés qui s’avèreraient positifs dans le test de reprotoxicité de niveau 4 et, par la suite, de niveau 5 lorsque le test sur cycle de vie complet sera disponible.
Méthodologie
L’option retenue dans PLAYLYST est d’avoir recours à l’expression des gènes du récepteur aux œstrogènes (ER) et du récepteur X aux rétinoïdes de la lymnée (respectivement dénommés LymER et LymRXR) dans un système cellulaire rapporteur sur lequel seront testés un certain nombre de perturbateurs endocriniens parmi lesquels l’éthynylestradiol, le bisphenol A (et certains de ses substituts) et différents types de pesticides. Du point de vue méthodologique, PLAYLYST se décomposera en plusieurs étapes consistant successivement à :
- exploiter les ressources génétiques disponibles chez la lymnée et/ou d’autres espèces de mollusques pour obtenir la séquence des gènes ER et RXR
- synthétiser des vecteurs d’expression de ces gènes
- tester leur inductibilité par des ligands connus des récepteurs ER et RXR humains par transfection transitoire ou stabilisée
- Modéliser les domaines de fixation des ligands sur LymER et LymRXR de façon à tester in silico un plus grand nombre de ligands.
Résultats
Les approches in silico et in vitro développées dans le cadre de PLAYLYST vont contribuer à combler le manque de connaissances sur les capacités des récepteurs de mollusques à fixer des substances chimiques identifiées comme des perturbateurs endocriniens chez les vertébrés. De plus, permettront d’interpréter les mécanismes qui sous-tendent les effets néfastes qui pourront être mis en évidence dans les tests de reprotoxicité basés sur le protocole décrit dans la Ligne Directrice OCDE en cours d’élaboration. À terme, les tests in silico et in vitro mis au point sur la base des résultats de PLAYLYST pourraient constituer des tests de niveaux 1 et 2 dans le Cadre Conceptuel de l’OCDE pour l’analyse et l’évaluation des perturbateurs endocriniens.
Personnes impliquées
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BESNARD Anne-Laure, Assistante-Ingénieure
Téléphone : +33 2 23 48 54 43 Email : anne-laure.besnard(at)inrae.fr |
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COUTELLEC Marie-Agnès, Chargée de recherche
Téléphone : +33 2 23 48 52 48 Email : marie-agnes.coutellec@inrae.fr |
Partenaires
Financements
Ce programme est financé par le Ministère de l’Écologie, du Développement Durable et de l’Énergie, dans le cadre du Programme National de Recherche sur les Perturbateurs Endocriniens (PNRPE)